A novel 96-microwell-based high-throughput spectrophotometric assay for pharmaceutical quality control of crizotinib, a novel potent drug for the treatment of non-small cell lung cancer / Um ensaio espectrofotométrico de alto rendimento à base de novo de 96 micropoços para o controlo de qualidade farmacêutica crizotinibe, um novo potente fármaco para o tratamento de cancro do pulmão de células não-pequenas

This study describes the development and validation of a novel 96-microwell-based high throughput spectrophotometric assay for pharmaceutical quality control of crizotinib (CZT), a novel drug for the treatment of non-small cell lung cancer. We examined the reaction between CZT and 1,2-naphthoquinone-4-sulphonate, a chromogenic reagent. A red-colored product showing a maximum absorption peak (λ_max) at 490 nm was produced in an alkaline medium (pH 9). We examined stoichiometry of the reaction and postulated the reaction mechanism. To our knowledge, this is the first study to describe a color-developing reaction for the proposed assay. The reaction was performed in a 96-microwell plate, and the absorbance of the colored product was measured using an absorbance reader at 490 nm. Under optimized reaction conditions, Beer's law, which shows a correlation between absorbance and CZT concentration, was obeyed in the range of 4-50 µg/well with an appropriate correlation coefficient (0.999). The limits of detection and quantification were 1.73 and 5.23 µg/well, respectively. The assay showed high precision and accuracy. The proposed assay was applied successfully for the determination of CZT in capsules. Thus, the assay proposed in this study is practical and valuable for routine application in pharmaceutical quality control laboratories...

Este estudo descreve o desenvolvimento e a validação de um novo ensaio espectrofotométrico em larga escala em 96 micropoços para o controle farmacêutico de crizotinibe (CZT), novo fármaco para o tratamento de câncer de pulmão de células não pequenas. Examinamos a reação entre o CZT e o 4-sulfonato de 1,2-naftoquinona, um reagente cromogênico. Obteve-se, em meio alcalino (pH 9), produto vermelho, com absorção máxima (λ_max) em 490 nm. Examinamos a estequiometria da reação e propusemos mecanismo de reação. Este, segundo nosso conhecimento, é o primeiro estudo para descrever reação de desenvolvimento de cor para o ensaio proposto. A reação foi realizada em placas de 96 micropoços e mediu-se a absorbância do produto colorido utilizando-se leitor de absorbância a 490 nm. Sob condições otimizadas de reação, a lei de Beer, que mostra a correlação entre a absorbância e a concentração de CZT, foi obedecida na faixa de 4-50 µg/poço, com coeficiente de correlação apropriado (0,999). Os limites de detecção e de quantificação foram, respectivamente, 1,73 e 5,23 µg/poço. O ensaio mostrou alta precisão e exatidão. O ensaio proposto foi aplicado com sucesso para a determinação de CZT em cápsulas e é prático e válido para a aplicação de rotina em laboratórios de controle farmacêutico...

Detection and identification of huwentoxin-IV interacting proteins by biotin-avidin chemistry combined with mass spectrometry

Numerous spider toxins are of interest as tools for neurophysiological research or as lead molecules for the development of pharmaceuticals and insecticides. Direct detection and identification of the interacting proteins of a spider toxin are helpful for its action-mechanism analysis and practical application. The present study employed a combinative strategy for the analysis of interacting proteins of huwentoxin-IV (HWTX-IV), a peptidic neurotoxin from the venom of the spider Selenocosmia huwena.

Detection and identification of huwentoxin-IV interacting proteins by biotin-avidin chemistry combined with mass spectrometry

Numerous spider toxins are of interest as tools for neurophysiological research or as lead molecules for the development of pharmaceuticals and insecticides. Direct detection and identification of the interacting proteins of a spider toxin are helpful for its action-mechanism analysis and practical application. The present study employed a combinative strategy for the analysis of interacting proteins of huwentoxin-IV (HWTX-IV), a peptidic neurotoxin from the venom of the spider Selenocosmia huwena.

Method development and validation for naratriptan determination in human plasma by HPLC with tandem mass spectrometry detection, and its application to bioequivalence study / Desenvolvimento de método e validação para determinação de naratriptan em plasma humano por HPLC com detecção de espectrometria de massa em tandem, e sua aplicação ao estudo de bioequivalência

The authors developed a simple, sensitive and specific liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) method for the quantification of naratriptan (NP) in human plasma using naratriptan-d3 (NPD3) as an internal standard (IS). Chromatographic separation was performed on a Zorbax SB-C18, 75 x 4.6 mm, 3.5 µm column with an isocratic mobile phase composed of 0.1 percent formic acid : acetonitrile (50:50 v/v), at a flow-rate of 0.6 mL/min. NP and NPD3 were detected with proton adducts at m/z 336.5→98.0 and 339.4→101.0 in selected reaction monitoring (SRM) positive mode, respectively. The liquid-liquid extraction method was used to extract the NP and NPD3. This method was validated over a linear concentration range of 0.1-25.0 ng/mL with a correlation coefficient of (r2) > 0.9998. The Intra-day and Interday precision was found to be 1.8 to 3.6 percent, and 2.3 to 2.6 percent, and accuracy to be 101.7- 104.2 percent and 101.8 to 102.9 percent, respectively. NP was found to be stable throughout freeze-thaw (three cycles), bench top and auto sampler stability studies. This method was successfully applied for the analysis of plasma samples following oral administration of NP (2.5 mg) in 31 healthy Indian male human volunteers under fasting conditions.

Os autores desenvolveram um método simples, sensível e específico de cromatografia líquida-espectrometria de massa-tandem (LC-MS/MS) para a quantificação de naratriptan (NP) em plasma humano empregando naratriptan-d3 (NPD3) como padrão interno de referência (IS). A separação cromatográfica foi realizada em coluna Zorbax SB-C18, 75 x 4,6 mm, 3,5 μm com fase móvel isocrática composta por 0,1 por cento ácido fórmico : acetronitrila (50:50 v/v) e taxa de fluxo de 0,6 mL/min. NP e NPD3 foram detectados com adutos de prótons a m/z 336.5→98.0 e 339.4→101.0 in em modo positivo do tipo monitoramento de reação selecionada (SRM), respectivamente. Extração líquido-líquido foi empregada para extrair NP e NPD3, sendo o método validado para uma faixa linear de concentração de 0,1-25,0 ng/mL resultando em coeficiente de correlação (r2) > 0,9998. A variação intra e interdia observada para precisão foi de 1,8 a 3,6 por cento e 2,3 a 2,6 por cento, respectivamente; para exatidão a variação foi de 101,7 a 104,2 por cento e 101,8 a 102,9 por cento, respectivamente. O NP se mostrou estável frente a processos de congelamento-descongelamento (3 ciclos), e estudos de estabilidade de bancada e amostragem automática. O método desenvolvido foi aplicado com sucesso para a análise de amostras de plasma após a administração oral de 2,5 mg de NP em 31 voluntários humanos, de nacionalidade indiana, sexo masculino, sob condições aceleradas.